血生化指标是动物实验过程中判定实验结果最常用的指标之一，因而血生化检测结果的准确性直接影响动物实验结果的正确性和可靠性。血清的处理方式是血生化指标检测过程中的重要环节，如果血清处理不当，可直接影响血生化检测结果的准确性。大鼠是医学研究过程中使用频率较高的实验动物种类，本文选择了大鼠的14项常规血生化指标进行了检测，观察4℃和-20℃两种不同保存温度下血清分别放置0h、4h、24h、96h、7d血生化指标的变化，为科研人员在血生化检测方面提供技术指导。

1、 实验方法

1）血生化测定 大鼠禁食12h，采集静脉血液标本，静置1h，分离血清并密封分装后，分别存放于4℃和-20℃，应用全自动生化分析仪分别于分离血清后0h、4h、24h、96h、7d检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、肌酐（CREA⁃J）、尿酸（UA）、尿素氮（UREA）、血糖（GLU）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL⁃C）、肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）等14项血生化指标。

2）统计学方法 采用SPSS13.0统计分析软件进行处理，实验数据以平均数 ± 标准差（ ±ｓ）表示，数据间的比较采用t检验分析方法，以P＜0.05表示差异有显著性。

2、结果

1）雌性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同时间血生化指标的变化与oh相比，ALP在4h、24h、96h、7d均显著降低（P＜0.05），ALB 在96h和7d均显著升高（P＜0.01），CREA-J在96h显著升高（P＜0.05），UA在24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），其他指标差异无显著性（P＞0.05）。详见表１。

表1 雌性SD大鼠血清放置不同时间血生化指标的变化（`X ±ｓ，4℃）

注：与0h，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

2）雄性SD大鼠血清存放于4℃下放置不同时间血生化指标的变化与0h相比，ALP在4h、24h、96h、7d均显著降低（P＜0.05），ALB 在96h和7d均显著升高（P＜0.05），CREA-J在96h和7d均显著升高（P＜0.05），UA在24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），其他指标差异无显著性（P＞0.05）。详见表2。

表2 雄性SD大鼠血清放置不同时间血生化指标的变化（`X ±ｓ，4℃）

注：与0h，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01

        3）雌性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同时间血生化指标的变化与0h相比，AST在96h和7d显著升高（P＜0.05），TP在4h和24h 显著降低（P＜0.05），ALB 在4h、24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），CREA-J在24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），UA在4h、24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），TC 在4h、24h、96h、7d均显著升高（P＜0.05），TG 在96h和7d显著升高（P＜0.05），CK在96h和7d显著升高（P＜0.05），LDH在96h和7d显著升高（P＜0.05），其他指标差异无显著性（P＞0.05）。详见表3。

表3 雌性SD大鼠血清放置不同时间血生化指标的变化（ `X ±S，-20℃）

注：与0h组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

  4）雄性SD大鼠血清存放于-20℃下放置不同时间血生化指标的变化与0h相比，ALT 在7d显著升高（P＜0.01），AST 在96h和7d显著升高（P＜0.05），TP在4h和24h 显著降低（P＜0.01），ALB 在4h、24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），CREA-J在96h和7d均显著升高（P＜0.01），UA在4h、24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），TC在4h、24h、96h、7d均显著升高（P＜0.01），TG在96h和7d显著升高（P＜0.05），CK在96h和7d显著升高（P＜0.05），LDH 在96h和7d显著升高（P＜0.05），其他指标差异无显著性（P＞0.05）。详见表4。

表4 雄性SD大鼠血清放置不同时间血生化指标的变化（`X±S，-20℃）

注：与0h组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01。

    为避免由于纤维蛋白未完全收缩造成血清中各成分浓度偏高，影响即刻值的准确性，此次试验是在采集大鼠静脉血后，先静置1h，待血标本收缩充分后，再离心、检测，测定的数值做为0h检测数据。由于血生化检测值受待检动物来源、年龄、性别、血标本采集途径、分离血清前标本静置时间、检测仪器以及检测试剂等多重因素的影响，因此收集了与本研究动物来源、鼠龄、性别相同的SD大鼠内部检测数据作为正常值参考范围。检测结果显示，0h样本检测值均在正常值参考范围内。

    本实验研究结果表明，血生化检测数据会因血清放置温度和放置时间的不同而发生改变。变化的原因是血清放置过程中标本中水分的蒸发作用、细胞酸碱度变化以及红细胞内容物逸出等多方面的作用。

    由实验结果分析，分离血清后，4℃保存时，放置4h后ALP指标较0h显著降低；-20℃保存时，放置7dALP指标较0h仍无变化；由此，当需要测定ALP时，离心后的血清最好即刻检测或者-20℃保存一周内检测。当需要测定UA时，由于采集的血清无论4℃还是-20℃保存，放置24h后UA值均显著或极显著升高，且放置7d时UA检测值已经超出正常参考值范围，而4℃放置4h则无显著变化，所以，离心后的血清最好即刻检测 UA或者4℃保存4h内必须检测UA。当需要测定ALB和 CREA-J时，离心后的血清需4℃保存且需24h内检测。-20℃保存时，血清放置7dALT和AST 指标较0h均显著升高，而4℃保存时，放置7d均无显著变化；由此，当需要测定ALT和AST 时，血清4℃保存一周内检测即可。-20℃保存时，TP值出现波动，在4h和24h较0h显著降低，96h和7d较0h无差异，在4℃保存时，放置7dTP值均无显著变化，测定TP宜4℃保存7d内进行。当测定TC、TG、LDL-C等血脂指标时，由于-20℃保存4h后较0hTC和TG均显著或极显著升高，而4℃保存时，放置7d均无显著变化，故宜4℃保存血清并一周内检测。当测定心肌酶指标CK和 LDH 时，由于-20℃保存96h后较0h均显著升高，而4℃保存时，放置7d均无显著变化，故4℃保存血清并一周内检测即可。实验结果显示，无论4℃还是-20℃保存标本，放置7d内UREA和GLU检测值较0h均无显著变化，故7d内检测即可。

    综上所述，为了使研究人员更加便于参考，ALT、AST、TP、UREA、GLU、TC、TG、LDL-C、CK及LDH等生化指标的检测，建议4℃保存血清并7d内检测即可；ALB和 CREA-J指标的检测，建议4℃保存血清并24h内检测；由于放置时间和方式对UA指标影响较大，离心后的血清最好即刻检测或者4℃保存4h内检测；对于ALP 的检测，离心后的血清最好即刻检测，如做不到，可-20℃保存一周内检测。

    总之，血生化测定指标不同，血清可放置的时间、放置的方式则不同，为保证血生化检测结果的准确性和可靠性，实验人员可根据所测指标选择适宜的血清保存方式并及时送检，同时，检测人员也应该对血清及时进行检测。此外，标本的采集时间、采集部位、标本是否溶血等也都是影响血生化检测结果的重要因素，这些影响因素对大鼠血生化检测结果的影响情况有待进一步探讨。

原创作者：康爱君，李雨薇，王学文，刘君芳，胡建国，郑振辉

原创单位：北京大学医学部实验动物科学部

发表杂志：中国比较医学杂志2017年12月第27卷第12期